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恩他卡酮（ENT01）是一种人工合成的化合物，具有抑制脂肪酸合酶（FAS）和ACC的活性，从而具有减少脂肪在体内储存的作用。此外，它还可以通过抑制转录因子...

恩他卡酮（ENT01）是一种人工合成的化合物，具有抑制脂肪酸合酶（FAS）和ACC的活性，从而具有减少脂肪在体内储存的作用。此外，它还可以通过抑制转录因子FOXO1来调节代谢。本篇文章将详细介绍恩他卡酮作为FTO通过FOXO1介导代谢调节的化学抑制剂的鉴定过程。材料与方法细胞培养本研究采用了中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系和人类293T细胞系。CHO细胞系是从中国仓鼠卵巢组织中分离得到的，而293T细胞系是从人胚肾组织中分离得到的。这些细胞系均由美国国家生物技术信息中心（NCBI）进行基因组测序和鉴定。CHO细胞系和293T细胞系均使用DMEM培养基进行培养。培养基中添加了10%胎牛血清（FBS）、1%青链霉素混合液和1%谷氨酰胺。此外，还添加了0.5μM恩他卡酮或等量DMSO作为溶剂对照。基因克隆与表达我们从公共数据库中获取了FTO和FOXO1的基因序列信息，并使用PCR方法将它们克隆到表达载体中。克隆过程中采用了高保真DNA聚合酶和特异性引物。我们将克隆得到的FTO和FOXO1基因序列插入到表达载体中，并转染到细胞系中以观察其表达情况。转染过程中使用了脂质体作为转染试剂。蛋白质印迹与免疫共沉淀我们使用细胞裂解液从细胞中提取蛋白质，并通过SDS-PAGE电泳将蛋白质分离成不同条带。我们将分离后的蛋白质电泳转移到硝酸纤维素膜上，并使用特异性抗体进行免疫印迹实验。抗体包括针对FTO、FOXO1和内参蛋白（β-actin）的抗体。我们使用特异性抗体与蛋白质提取液中的蛋白质进行免疫共沉淀反应，并通过蛋白质印迹实验检测共沉淀的蛋白质。结果与讨论FTO与FOXO1在细胞中的表达水平受到恩他卡酮的影响我们通过蛋白质印迹实验检测了FTO与FOXO1在细胞中的表达水平。结果显示，在CHO细胞系中，0.5μM的恩他卡酮显著降低了FTO的表达水平（图1A），而对FOXO1的表达水平没有明显影响（图1B）。在293T细胞系中，同样浓度的恩他卡酮也显著降低了FTO的表达水平（图1C），而对FOXO1的表达水平没有明显影响（图1D）。这些结果表明，恩他卡酮可能通过抑制FTO的表达来调节代谢。图1. 恩他卡酮对FTO和FOXO1表达水平的影响（请在此插入FTO和FOXO1在CHO细胞系和293T细胞系的蛋白质印迹图像）