蛋白质的测定实验步骤PPT
蛋白质是生物体内一类重要的生物大分子，其含量和性质对于生物体的正常生长和发育具有重要作用。因此，测定生物样品中蛋白质的含量和性质对于生物科学研究具有重要意...
蛋白质是生物体内一类重要的生物大分子，其含量和性质对于生物体的正常生长和发育具有重要作用。因此，测定生物样品中蛋白质的含量和性质对于生物科学研究具有重要意义。本实验将介绍几种常用的蛋白质测定方法及其实验步骤。紫外吸收法紫外吸收法是一种基于蛋白质在紫外光区有特征吸收峰的原理来测定蛋白质的方法。该方法具有操作简便、准确度高、灵敏度高等优点，适用于各种蛋白质的测定。实验步骤样品处理将待测样品用生理盐水或蒸馏水稀释至适当浓度，用离心机去除样品中的杂质和颗粒物样品测定将样品放入1cm光程的石英比色皿中，用紫外分光光度计在280nm波长处测定样品的吸光度标准曲线制作配制不同浓度的标准蛋白溶液，按照上述方法测定吸光度，绘制吸光度与浓度之间的标准曲线蛋白质浓度计算根据样品的吸光度和标准曲线，计算样品的蛋白质浓度考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法是一种基于染料与蛋白质结合的原理来测定蛋白质的方法。该方法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，适用于小分子蛋白质的测定。实验步骤试剂配制配制考马斯亮蓝染液（100ml），将染液放入棕色瓶中，摇匀后放置过夜样品处理将待测样品用蒸馏水稀释至适当浓度，加入适量考马斯亮蓝染液，摇匀样品测定将样品放入比色皿中，用分光光度计在595nm波长处测定样品的吸光度标准曲线制作配制不同浓度的标准蛋白溶液，按照上述方法测定吸光度，绘制吸光度与浓度之间的标准曲线蛋白质浓度计算根据样品的吸光度和标准曲线，计算样品的蛋白质浓度双缩脲法双缩脲法是一种基于蛋白质中的肽键与硫酸铜溶液反应生成紫色络合物的原理来测定蛋白质的方法。该方法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，适用于含有较多肽键的蛋白质的测定。实验步骤试剂配制配制双缩脲试剂（A液：100ml 0.1g/L硫酸铜溶液；B液：100ml 0.5g/L酒石酸钾钠溶液；使用时按1:1比例混合），摇匀备用样品处理将待测样品用蒸馏水稀释至适当浓度，加入适量双缩脲试剂，摇匀样品测定将样品放入比色皿中，用分光光度计在540nm波长处测定样品的吸光度标准曲线制作配制不同浓度的标准蛋白溶液，按照上述方法测定吸光度，绘制吸光度与浓度之间的标准曲线蛋白质浓度计算根据样品的吸光度和标准曲线，计算样品的蛋白质浓度酚试剂法酚试剂法是一种基于蛋白质与酚试剂反应生成蓝色化合物的原理来测定蛋白质的方法。该方法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，适用于各种蛋白质的测定。实验步骤试剂配制配制酚试剂溶液（100ml），将试剂放入棕色瓶中，摇匀后放置过夜样品处理将待测样品用蒸馏水稀释至适当浓度，加入适量酚试剂溶液，摇匀样品测定将样品放入比色皿中，用分光光度计在660nm波长处测定样品的吸光度标准曲线制作配制不同浓度的标准蛋白溶液，按照上述方法测定吸光度，绘制吸光度与浓度之间的标准曲线蛋白质浓度计算根据样品的吸光度和标准曲线，计算样品的蛋白质浓度以上是常用的几种蛋白质测定方法和实验步骤，每种方法都有其优缺点和适用范围，根据实际需要选择合适的方法进行测定。
